Àwọn Ìmọ̀-ẹ̀rọ Kírómátírì Fẹ́ẹ́rẹ́ Tínrín ní Ilé Ìtajà
Pendahuluan
Ìlànà ìwádìí onípele Thin Layer (TLC) jẹ́ ọ̀nà ìwádìí tí ó wọ́pọ̀ tí a ń lò nínú iṣẹ́ ìṣègùn. Ọ̀nà yìí ni a mọ̀ fún ìrọ̀rùn rẹ̀, iyára rẹ̀, àti owó tí ó lè ná, àti agbára rẹ̀ láti pèsè àwọn ìwífún nípa ìṣètò àpẹẹrẹ kan. Nínú àwọn ilé ìwòsàn ìṣègùn, a sábà máa ń lo TLC nínú ìwádìí àti ìdàgbàsókè oògùn, ìdánwò ohun èlò aise, àti ìṣàkóso dídára ọjà tí a ti parí. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a ń lo àwọn ohun èlò ìwádìí òde òní bíi HPLC àti LC-MS sí i, TLC ṣì ṣe pàtàkì nítorí pé ó rọrùn láti ṣiṣẹ́ àti agbára rẹ̀ gẹ́gẹ́ bí ọ̀nà ìwádìí àkọ́kọ́.
Àwọn Ìlànà Ìpìlẹ̀ ti Kírómátírì Fẹ́ẹ́rẹ́ Tínrín
Ìlànà TLC dá lórí ìpínyà àwọn èròjà adalu kan nítorí ìyàtọ̀ wọn nínú ìfàmọ́ra fún àwọn ìpele méjì: ìpele tí ó dúró àti ìpele tí ó ṣeé gbé kiri. Ìpele tí ó dúró jẹ́ ìpele tín-ín-rín ti àwọn ohun tí ó ń fa omi bíi silica gel, alumina, tàbí cellulose tí a fi bo gíláàsì, aluminiomu, tàbí àwo ike. Ìpele tí ó wà lórí ìpele tí ó dúró tàbí tí ó ṣeé gbé kiri tí ó ń gba ipò tí ó dúró nítorí iṣẹ́ capillary.
Nígbà tí a bá rí àpẹẹrẹ kan ní ìsàlẹ̀ àwo kan tí a sì gbé àwo náà sínú ohun èlò tí ń dàgbàsókè tí ó ní ìpele tí ń gbé kiri, ohun èlò tí ó ń jáde yóò rìn sókè. Àwọn èròjà tí ó lè yọ́ nínú ìpele tí ń gbé kiri tí ó sì ń bá ìpele tí ń gbé kiri díẹ̀ sí i yóò rìn jìnnà sí i, nígbà tí àwọn èròjà tí ó bá ń bá ìpele tí ń gbé kiri gidigidi sí i yóò di mọ́, wọn yóò sì rìn kíákíá. Àbájáde rẹ̀ ni ìpínyà ní ìrísí àwọn àmì ní àwọn ipò ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀.
Awọn paati pataki ni TLC
Nínú iṣẹ́ ìṣègùn, àṣeyọrí TLC da lórí yíyàn àti dídára àwọn èròjà pàtàkì rẹ̀:
1. Àwo TLC
A sábà máa ń fi jeli silica polar (SiO₂) bo àwọn àwo náà. Jeli silica yẹ fún yíyà ọ̀pọ̀lọpọ̀ irú àwọn èròjà oògùn sọ́tọ̀, pàápàá jùlọ àwọn tí wọ́n ní onírúurú èròjà. Àwọn àwo onípele tí a yí padà, bíi C18, tún wà fún àwọn èròjà tí kì í ṣe polar tàbí àwọn èròjà kan tí ó ṣòro láti yà sọ́tọ̀ ní ìpele déédéé.
2. Ìpele alágbéká (eluent)
Ẹ̀fúùfù náà lè jẹ́ ohun èlò ìtújáde kan ṣoṣo tàbí àdàpọ̀ kan. Yíyàn náà sinmi lórí àwọn ànímọ́ kẹ́míkà ti analyte náà, pàápàá jùlọ ìpìlẹ̀ rẹ̀. Àwọn àdàpọ̀ tí ó wọ́pọ̀ ní chloroform–methanol, ethyl acetate–hexane, tàbí toluene–acetate. A sábà máa ń ṣe àtúnṣe ìpíndọ́gba ohun èlò ìtújáde náà láti ṣe àṣeyọrí ìyàsọ́tọ̀ tí ó múná.
3. Ọkọ̀ ìdàgbàsókè
A gbọ́dọ̀ ti ìkòkò náà pa dáadáa kí ó lè jẹ́ kí afẹ́fẹ́ omi tó ń yọ́ jáde nínú yàrá náà. Ìwọ̀n tó kún yìí máa ń mú kí ìdàgbàsókè rẹ̀ túbọ̀ dúró ṣinṣin àti kí ó sì dára sí i.
4. Àwọn àpẹẹrẹ àti àwọn ìlànà ìfiwéra
Nínú ìwádìí oògùn, a sábà máa ń fi àwọn àpẹẹrẹ wé àwọn ìlànà láti fi hàn pé a mọ ẹni tàbí pé a mọ́ wọn. Rírí ìwọ̀n àti àpẹẹrẹ náà lórí àwo kan náà ń mú kí ìtumọ̀ náà ṣeé gbẹ́kẹ̀lé.
5. Ṣíṣàwárí àwọn ibi tí a kò rí
A le rii awọn aami ti o wa ni oju ti wọn ba ni awọ, tabi lilo ina UV (254 nm tabi 366 nm). Tabi, a le lo awọn ohun elo fifa omi gẹgẹbi ninhydrin (fun awọn amino acids), Dragendorff (fun awọn alkaloids), anisaldehyde sulfate (fun awọn metabolites oriṣiriṣi), tabi iodine.
Awọn ipele ti imuse KLT
Ilana TLC ni ile elegbogi ni gbogbogbo pẹlu awọn igbesẹ pataki wọnyi:
1. Ṣíṣe àwo
Tí a bá ń lo àwọn àwo tí a ti ṣetán láti lò, ìgbésẹ̀ yìí rọrùn. Síbẹ̀síbẹ̀, ní àwọn ìgbà míì, àwọn àwo náà lè nílò láti ṣiṣẹ́ nípa gbígbóná (fún àpẹẹrẹ, sí 100–120°C) láti mú ọrinrin tí ó lè nípa lórí ìyàsọ́tọ̀ kúrò.
2. Ṣíṣàyẹ̀wò àpẹẹrẹ
A fi capillary tàbí micropipette ṣe àyẹ̀wò náà ní ìlà ìbẹ̀rẹ̀, pẹ̀lú ìyàtọ̀ pàtó láàárín àwọn ààyè náà. Àwọn ààyè náà gbọ́dọ̀ jẹ́ kékeré àti kí ó le koko kí ààyè náà má baà tàn kálẹ̀.
3. Ìdàgbàsókè kírómátógírámù
A gbé àwo náà sí yàrá tí ó ń dàgbà pẹ̀lú ìpele omi tí ó wà ní ìsàlẹ̀ ìlà ibi tí ó wà. A jẹ́ kí omi náà ga sí ìpele tí a fẹ́, lẹ́yìn náà a yọ àwo náà kúrò tí a sì gbẹ ẹ́.
4. Ìríran àti ìdámọ̀ àwọn àbàwọ́n
Lẹ́yìn gbígbẹ, a ó rí àwọn àmì náà pẹ̀lú UV tàbí àwọn ohun èlò ìfọ́nrán. Lẹ́yìn náà, a ó wọn àwọn ipò àmì náà láti ṣírò iye Rf (Retardation factor):
\[
R_f = \frac{\text{spot travel distance}}{\text{solvent front travel distance}}
\]
A le lo iye Rf gẹ́gẹ́ bí paramita ìdámọ̀, pàápàá jùlọ nígbà tí a bá fiwé pẹ̀lú àwọn ìlànà tí a sì ṣe lábẹ́ àwọn ipò ìṣàyẹ̀wò kan náà.
Àwọn Ohun Èlò TLC ní Ilé Ìtajà
TLC ni ọpọlọpọ awọn ohun elo pataki pupọ ni agbaye oogun, pẹlu:
1. Ṣíṣàfihàn àwọn ohun èlò aise fún àwọn oògùn
A sábà máa ń lo TLC láti rí i dájú pé àwọn ohun èlò tí a gbà bá àwọn ìlànà mu. Fún àpẹẹrẹ, a lè ṣe ìdámọ̀ ohun èlò kan pàtó nípa fífi Rf àyẹ̀wò wé ìwọ̀n ìṣàpẹẹrẹ kan.
2. Idanwo mimọ ati wiwa ẹgbin
Nínú ìṣàkóso dídára, TLC lè fi hàn pé àwọn ohun tí kò ní ìdọ̀tí tàbí àwọn ohun tí ó ń ba jẹ́ wà. Àwọn àbàwọ́n míràn tí ó kọjá ibi àkọ́kọ́ fi hàn pé àwọn ohun tí kò ní ìdọ̀tí lè wà.
3. Ṣíṣe àbójútó ilana ìṣẹ̀dá
Nínú ìwádìí àti ìdàgbàsókè oògùn, a lo TLC láti ṣe àkíyèsí àwọn ìṣesí kẹ́míkà: bóyá àwọn ohun tí ń fa ìṣẹ̀lẹ̀ náà ṣì wà, bóyá àwọn ọjà náà wà, àti nígbà tí ìṣesí náà bá dé ibi tí ó dára jùlọ.
4. Ìwádìí nípa oògùn àti ewéko
A lo TLC pupọ ninu itupalẹ awọn ohun elo ọgbin oogun. Diẹ ninu awọn ile-iwosan tun ṣe atokọ awọn ọna TLC fun idanimọ awọn agbo ogun ami ninu awọn ọja ewebe.
5. Idanwo iduroṣinṣin ti o rọrun
Nínú àwọn ìwádìí ìdúróṣinṣin àkọ́kọ́, TLC lè ṣe ìrànlọ́wọ́ láti rí bí àwọn ọjà ìbàjẹ́ ṣe ń wáyé nítorí ooru, ìmọ́lẹ̀, tàbí ọrinrin.
Awọn anfani ati awọn idiwọn ti TLC
Iwaju
– Yára àti owó díẹ̀ ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ọ̀nà ìfipamọ́ ohun èlò tó díjú.
– Rọrùn láti ṣe àti pé kò nílò ohun èlò tó gbowó lórí.
– Rọrùn, nítorí pé ó lè ya ọ̀pọ̀lọpọ̀ irú àwọn èròjà pẹ̀lú àwọn ìyàtọ̀ nínú àwọn ohun èlò ìṣiṣẹ́ àti àwọn ìpele tí ó dúró.
– Ìṣàyẹ̀wò tó munadoko, tó yẹ fún àwọn ìpele àkọ́kọ́ ti ìṣàyẹ̀wò tàbí ìwádìí.
Àwọn ìdíwọ́
– Àtúnṣe máa ń burú nígbà míì tí a kò bá ṣàkóso àwọn ipò dáadáa (ìwọ̀n ìṣàn omi, ọriniinitutu, dídára omi).
– Iye iye ni opin, botilẹjẹpe a le mu dara si pẹlu densitometry (TLC Scanner).
– Ìfàmọ́ra sábà máa ń dín ju HPLC tàbí LC-MS lọ.
Awọn Idagbasoke Ode-Ojo: HPTLC
Gẹ́gẹ́ bí ìdàgbàsókè TLC, a mọ Chromatography Tinrin-Layer High-Performance (HPTLC). HPTLC ń lo àwọn àwo pẹ̀lú àwọn èròjà kéékèèké àti ìpele tó dọ́gba, èyí tó ń yọrí sí ìyàtọ̀ tó múná jù, tó sì ṣe pàtàkì jù, tí a lè ṣàyẹ̀wò ní ìwọ̀n nípa lílo àwọn ẹ̀rọ ìwádìí densitometric. Nínú iṣẹ́ oògùn, HPTLC ń fúnni ní ìwọ̀ntúnwọ̀nsì láàárín ìrọ̀rùn TLC àti ìṣedéédé àwọn ọ̀nà ìṣiṣẹ́ òde òní.
Ipari
Kírómátọ́ọ̀gì Tín-láàyè (TLC) ṣì jẹ́ ọ̀nà ìwádìí pàtàkì nínú iṣẹ́ ìṣègùn nítorí ìrọ̀rùn rẹ̀, iyàrá rẹ̀, àti ìyípadà rẹ̀. TLC wúlò fún ìdámọ̀, ìdánwò mímọ́, ìṣàyẹ̀wò ìṣẹ̀dá, àti ìṣàyẹ̀wò ọjà àdánidá. Láìka àwọn ìdíwọ́ nínú ìwọ̀n àti ìfàmọ́ra sí, TLC ṣì jẹ́ àṣàyàn àkọ́kọ́ fún àyẹ̀wò àti ìdánwò déédéé. Pẹ̀lú ìdàgbàsókè HPTLC, àwọn agbára TLC ti pọ̀ sí i, èyí tí ó mú kí ó lè bá àwọn àìní ti ìṣàyẹ̀wò oògùn tí ó le koko àti tí ó wọ́pọ̀ mu.
Tí o bá fẹ́, mo lè fi àwọn àpẹẹrẹ ìwádìí kún un (fún àpẹẹrẹ, ìdámọ̀ paracetamol, caffeine, tàbí àwọn èròjà àmì nínú turmeric) pẹ̀lú àwọn àbá fún àwọn ìgbésẹ̀ alágbékalẹ̀ àti àwọn ọ̀nà ìwòran tí a sábà máa ń lò nínú yàrá ìwádìí.
