ເຕັກນິກໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຊັ້ນບາງໆໃນຮ້ານຂາຍຢາ
Pendahuluan
ການວິເຄາະດ້ວຍວິທີ Thin Layer Chromatography (TLC) ເປັນເຕັກນິກການວິເຄາະທົ່ວໄປທີ່ໃຊ້ໃນອຸດສາຫະກໍາຢາ. ວິທີການນີ້ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກກັນດີໃນດ້ານຄວາມງ່າຍດາຍ, ຄວາມໄວ, ແລະລາຄາທີ່ເໝາະສົມ, ພ້ອມທັງຄວາມສາມາດໃນການໃຫ້ຂໍ້ມູນດ້ານຄຸນນະພາບທີ່ສໍາຄັນກ່ຽວກັບສ່ວນປະກອບຂອງຕົວຢ່າງ. ໃນຫ້ອງທົດລອງຢາ, TLC ມັກຖືກນໍາໃຊ້ໃນການຄົ້ນຄວ້າ ແລະ ການພັດທະນາຢາ, ການທົດສອບວັດຖຸດິບ, ແລະ ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຜະລິດຕະພັນສໍາເລັດຮູບ. ເຖິງແມ່ນວ່າເຄື່ອງມືວິເຄາະທີ່ທັນສະໄໝເຊັ່ນ HPLC ແລະ LC-MS ຖືກນໍາໃຊ້ເພີ່ມຂຶ້ນເລື້ອຍໆ, TLC ຍັງຄົງມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຍ້ອນຄວາມສະດວກໃນການໃຊ້ງານ ແລະ ທ່າແຮງຂອງມັນເປັນວິທີການກວດສອບເບື້ອງຕົ້ນ.
ຫຼັກການພື້ນຖານຂອງໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຊັ້ນບາງ
ຫຼັກການຂອງ TLC ແມ່ນອີງໃສ່ ການແຍກສ່ວນປະກອບຂອງສ່ວນປະສົມ ໂດຍອີງໃສ່ຄວາມແຕກຕ່າງໃນຄວາມຜູກພັນຂອງແຕ່ລະອົງປະກອບສຳລັບສອງໄລຍະຄື: ໄລຍະຢຸດນິ້ງ ແລະ ໄລຍະເຄື່ອນທີ່. ໄລຍະຢຸດນິ້ງມັກຈະເປັນຊັ້ນບາງໆຂອງສານດູດຊຶມເຊັ່ນ: ຊິລິກາເຈວ, ອະລູມິນາ, ຫຼື ເຊລລູໂລສທີ່ເຄືອບຢູ່ເທິງແຜ່ນແກ້ວ, ອາລູມິນຽມ, ຫຼື ພາດສະຕິກ. ໃນຂະນະດຽວກັນ, ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ແມ່ນຕົວລະລາຍ ຫຼື ສ່ວນປະສົມຂອງຕົວລະລາຍທີ່ເຄື່ອນທີ່ຜ່ານໄລຍະຢຸດນິ້ງເນື່ອງຈາກການກະທຳຂອງເສັ້ນເລືອດຝອຍ.
ເມື່ອຕົວຢ່າງຖືກພົບເຫັນຢູ່ດ້ານລຸ່ມຂອງແຜ່ນ ແລະ ແຜ່ນຖືກວາງໄວ້ໃນພາຊະນະທີ່ກຳລັງພັດທະນາທີ່ມີເຟສເຄື່ອນທີ່, ຕົວລະລາຍຈະເຄື່ອນທີ່ຂຶ້ນໄປທາງເທິງ. ສ່ວນປະກອບທີ່ລະລາຍໄດ້ຫຼາຍກວ່າໃນເຟສເຄື່ອນທີ່ ແລະ ມີປະຕິກິລິຍາໜ້ອຍກວ່າກັບເຟສທີ່ຢູ່ກັບທີ່ ຈະເຄື່ອນທີ່ໄປໄດ້ໄກກວ່າ, ໃນຂະນະທີ່ສ່ວນປະກອບທີ່ມີປະຕິກິລິຍາແຮງກວ່າກັບເຟສທີ່ຢູ່ກັບທີ່ຈະຖືກຮັກສາໄວ້ ແລະ ເຄື່ອນທີ່ໜ້ອຍລົງ. ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນການແຍກອອກຈາກກັນໃນຮູບແບບຂອງຈຸດຕ່າງໆໃນຕຳແໜ່ງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ອົງປະກອບຫຼັກໃນ TLC
ໃນການປະຕິບັດດ້ານການຢາ, ຄວາມສຳເລັດຂອງ TLC ແມ່ນຂຶ້ນກັບການຄັດເລືອກ ແລະ ຄຸນນະພາບຂອງສ່ວນປະກອບຫຼັກຂອງມັນ:
1. ແຜ່ນ TLC
ແຜ່ນດັ່ງກ່າວມັກຈະຖືກເຄືອບດ້ວຍຊິລິກາເຈວທີ່ມີຂົ້ວ (SiO₂). ຊິລິກາເຈວແມ່ນເໝາະສົມສຳລັບການແຍກສານປະກອບຢາຫຼາຍຊະນິດ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນສານທີ່ມີຂົ້ວທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ແຜ່ນທີ່ມີໄລຍະປີ້ນກັບກັນ, ເຊັ່ນ C18, ຍັງມີໃຫ້ສຳລັບສານປະກອບທີ່ບໍ່ມີຂົ້ວຫຼາຍ ຫຼື ສານປະກອບບາງຊະນິດທີ່ຍາກທີ່ຈະແຍກອອກໃນໄລຍະປົກກະຕິ.
2. ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ (eluent)
ສານລະລາຍສາມາດເປັນຕົວລະລາຍດ່ຽວ ຫຼື ສ່ວນປະສົມ. ທາງເລືອກແມ່ນຂຶ້ນກັບຄຸນສົມບັດທາງເຄມີຂອງສານວິເຄາະ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນຂົ້ວຂອງມັນ. ສ່ວນປະສົມທົ່ວໄປປະກອບມີ chloroform–methanol, ethyl acetate–hexane, ຫຼື toluene–acetate. ອັດຕາສ່ວນຂອງຕົວລະລາຍມັກຈະຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີທີ່ສຸດເພື່ອໃຫ້ໄດ້ການແຍກຕົວທີ່ຄົມຊັດ.
3. ເຮືອພັດທະນາ
ເຮືອຕ້ອງປິດຢ່າງສະນິດເພື່ອໃຫ້ພື້ນທີ່ ອີ່ມຕົວດ້ວຍໄອລະລາຍຄວາມອີ່ມຕົວນີ້ຊ່ວຍສ້າງການພັດທະນາທີ່ສະໝໍ່າສະເໝີ ແລະ ຮອຍດ່າງທີ່ດີຂຶ້ນ.
4. ຕົວຢ່າງ ແລະ ມາດຕະຖານການປຽບທຽບ
ໃນການວິເຄາະຢາ, ຕົວຢ່າງມັກຈະຖືກປຽບທຽບກັບມາດຕະຖານເພື່ອຢືນຢັນຄວາມເປັນເອກະລັກ ຫຼື ຄວາມບໍລິສຸດ. ການລະບຸມາດຕະຖານ ແລະ ຕົວຢ່າງໃນແຜ່ນດຽວກັນເພີ່ມຄວາມໜ້າເຊື່ອຖືຂອງການຕີຄວາມ.
5. ການກວດຈັບຈຸດ
ຈຸດຕ່າງໆສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້ດ້ວຍຕາຖ້າພວກມັນມີສີ, ຫຼືໃຊ້ແສງ UV (254 nm ຫຼື 366 nm). ອີກທາງເລືອກໜຶ່ງ, ໃຫ້ສີດສານປະຕິກິລິຍາເຊັ່ນ: ninhydrin (ສຳລັບ ກົດອະມິໂນ), ດຣາເຈັນດໍຟ (ອັລຄາລອຍ), ອານິສລດີໄຮດ໌-ຊັນເຟດ (ສານເມຕາໂບໄລຕ່າງໆ), ຫຼື ໄອໂອດິນ.
ຂັ້ນຕອນຂອງການຈັດຕັ້ງປະຕິບັດ KLT
ຂັ້ນຕອນ TLC ໃນຮ້ານຂາຍຢາໂດຍທົ່ວໄປປະກອບມີຂັ້ນຕອນທີ່ສຳຄັນດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
1. ການກະກຽມແຜ່ນ
ຖ້າໃຊ້ແຜ່ນທີ່ພ້ອມໃຊ້ແລ້ວ, ຂັ້ນຕອນນີ້ແມ່ນງ່າຍດາຍ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນບາງກໍລະນີ, ແຜ່ນອາດຈະຕ້ອງໄດ້ຮັບການກະຕຸ້ນໂດຍການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ (ເຊັ່ນ: ເຖິງ 100–120°C) ເພື່ອກຳຈັດຄວາມຊຸ່ມຊື່ນທີ່ອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການແຍກຕົວ.
2. ການກວດຕົວຢ່າງ
ຕົວຢ່າງຈະຖືກກວດໂດຍໃຊ້ທໍ່ດູດ capillary ຫຼື micropipette ຢູ່ເສັ້ນເລີ່ມຕົ້ນ, ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງຈຸດຕ່າງໆ. ຈຸດຕ່າງໆຄວນຈະມີຂະໜາດນ້ອຍ ແລະ ໜາແໜ້ນເພື່ອປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ຈຸດດັ່ງກ່າວແຜ່ລາມ.
3. ການພັດທະນາໂຄຣມາໂຕແກຣມ
ແຜ່ນດັ່ງກ່າວຖືກວາງໄວ້ໃນຫ້ອງພັດທະນາໂດຍໃຫ້ລະດັບຕົວລະລາຍຢູ່ຕ່ຳກວ່າເສັ້ນຈຸດ. ຕົວລະລາຍຖືກປ່ອຍໃຫ້ເພີ່ມຂຶ້ນເຖິງລະດັບທີ່ຕ້ອງການ, ຫຼັງຈາກນັ້ນແຜ່ນດັ່ງກ່າວຈະຖືກເອົາອອກ ແລະ ຕາກໃຫ້ແຫ້ງ.
4. ການເບິ່ງເຫັນ ແລະ ການລະບຸຈຸດຕ່າງໆ
ຫຼັງຈາກແຫ້ງແລ້ວ, ຈຸດຕ່າງໆຈະຖືກສັງເກດເຫັນດ້ວຍນໍ້າຢາ UV ຫຼື ສະເປຣ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕຳແໜ່ງຂອງຈຸດຕ່າງໆຈະຖືກວັດແທກເພື່ອຄິດໄລ່ຄ່າ Rf (ປັດໄຈການຊັກຊ້າ):
\[
R_f = \frac{\text{ໄລຍະທາງເຄື່ອນທີ່ຂອງຈຸດ}}{\text{ໄລຍະທາງເຄື່ອນທີ່ຂອງໜ້າຕົວລະລາຍ}}
\]
ຄ່າ Rf ສາມາດໃຊ້ເປັນຕົວກໍານົດການລະບຸຕົວຕົນໄດ້, ໂດຍສະເພາະເມື່ອປຽບທຽບກັບມາດຕະຖານ ແລະ ປະຕິບັດພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການວິເຄາະດຽວກັນ.
ການນຳໃຊ້ TLC ໃນຮ້ານຂາຍຢາ
TLC ມີການນຳໃຊ້ທີ່ສຳຄັນຫຼາຍຫຼາກຫຼາຍໃນໂລກການຢາ, ລວມທັງ:
1. ການກໍານົດວັດຖຸດິບສໍາລັບຢາ
TLC ມັກຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າວັດຖຸດິບທີ່ໄດ້ຮັບນັ້ນຕອບສະໜອງຕາມສະເປັກ. ຕົວຢ່າງເຊັ່ນ ການລະບຸສານປະສົມ ການເຄື່ອນໄຫວສະເພາະສາມາດເຮັດໄດ້ໂດຍການປຽບທຽບ Rf ຂອງຕົວຢ່າງກັບມາດຕະຖານຢ່າງເປັນທາງການ.
2. ການທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດ ແລະ ການກວດຈັບສິ່ງປົນເປື້ອນ
ໃນການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ, TLC ສາມາດຊີ້ບອກເຖິງຄວາມບໍລິສຸດຂອງສິ່ງເຈືອປົນ ຫຼື ຜະລິດຕະພັນທີ່ເສື່ອມສະພາບ. ຈຸດເພີ່ມເຕີມນອກເໜືອຈາກຈຸດຕົ້ນຕໍຊີ້ບອກເຖິງສິ່ງເຈືອປົນທີ່ອາດເກີດຂຶ້ນ.
3. ຕິດຕາມກວດກາຂະບວນການສັງເຄາະ
ໃນການຄົ້ນຄວ້າ ແລະ ພັດທະນາຢາ, TLC ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອຕິດຕາມກວດກາປະຕິກິລິຍາເຄມີ: ວ່າຍັງມີສານຕັ້ງຕົ້ນຢູ່ຫຼືບໍ່, ຜະລິດຕະພັນໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນແລ້ວຫຼືບໍ່, ແລະ ເມື່ອປະຕິກິລິຍາບັນລຸຈຸດທີ່ດີທີ່ສຸດ.
4. ການວິເຄາະຢາພືດ ແລະ ສະໝຸນໄພ
TLC ຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການວິເຄາະສານສະກັດຈາກພືດທີ່ເປັນຢາ. ບາງວາລະສານຢາຍັງລະບຸວິທີການ TLC ສຳລັບການກຳນົດສານປະກອບເຄື່ອງໝາຍໃນຜະລິດຕະພັນສະໝຸນໄພ.
5. ການທົດສອບຄວາມໝັ້ນຄົງແບບງ່າຍໆ
ໃນການສຶກສາຄວາມໝັ້ນຄົງໃນເບື້ອງຕົ້ນ, TLC ສາມາດຊ່ວຍກວດຫາການກໍ່ຕົວຂອງຜະລິດຕະພັນທີ່ເສື່ອມສະພາບຍ້ອນຄວາມຮ້ອນ, ແສງສະຫວ່າງ ຫຼື ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ.
ຂໍ້ດີ ແລະ ຂໍ້ຈຳກັດຂອງ TLC
ຄວາມດີເລີດ
- ໄວ ແລະ ປະຫຍັດເມື່ອທຽບກັບວິທີການໃຊ້ເຄື່ອງມືທີ່ສັບສົນ.
- ງ່າຍຕໍ່ການເຮັດ ແລະ ບໍ່ຕ້ອງໃຊ້ອຸປະກອນລາຄາແພງ.
- ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນ, ເພາະມັນສາມາດແຍກສານປະກອບຫຼາຍຊະນິດທີ່ມີການປ່ຽນແປງຂອງຕົວລະລາຍ ແລະ ໄລຍະທີ່ຢູ່ກັບທີ່.
- ການກວດສອບທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ເໝາະສົມສຳລັບໄລຍະເບື້ອງຕົ້ນຂອງການວິເຄາະ ຫຼື ການຄົ້ນຄວ້າ.
ຂໍ້ຈຳກັດ
- ບາງຄັ້ງການສືບພັນແມ່ນບໍ່ດີ ຖ້າເງື່ອນໄຂຕ່າງໆບໍ່ໄດ້ຮັບການຄວບຄຸມຢ່າງເຂັ້ມງວດ (ຄວາມອີ່ມຕົວຂອງເສັ້ນເລືອດ, ຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ, ຄຸນນະພາບຂອງຕົວລະລາຍ).
- ການວັດແທກປະລິມານມີຈຳກັດ, ເຖິງແມ່ນວ່າມັນສາມາດປັບປຸງໄດ້ດ້ວຍການວັດແທກຄວາມໜາແໜ້ນ (TLC Scanner).
- ຄວາມອ່ອນໄຫວມັກຈະຕ່ຳກວ່າ HPLC ຫຼື LC-MS.
ການພັດທະນາທີ່ທັນສະໄໝ: HPTLC
ໃນຖານະເປັນການພັດທະນາຂອງ TLC, ການວິເຄາະດ້ວຍໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຊັ້ນບາງປະສິດທິພາບສູງ (HPTLC). HPTLC ໃຊ້ແຜ່ນທີ່ມີອະນຸພາກທີ່ລະອຽດກວ່າ ແລະ ຊັ້ນທີ່ເປັນເອກະພາບກວ່າ, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ການແຍກທີ່ຄົມຊັດ ແລະ ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍຂຶ້ນ ເຊິ່ງສາມາດວິເຄາະໄດ້ຢ່າງມີປະລິມານໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງສະແກນຄວາມໜາແໜ້ນ. ໃນອຸດສາຫະກຳການຢາ, HPTLC ສະເໜີຄວາມສົມດຸນລະຫວ່າງຄວາມສະດວກສະບາຍຂອງ TLC ແລະ ຄວາມແມ່ນຍຳຂອງວິທີການວັດແທກເຄື່ອງມືທີ່ທັນສະໄໝ.
ສະຫຼຸບ
ເຕັກນິກ Thin Layer Chromatography ເປັນວິທີການວິເຄາະ TLC ຍັງຄົງມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍໃນອຸດສາຫະກຳການຢາ ເນື່ອງຈາກຄວາມລຽບງ່າຍ, ຄວາມໄວ ແລະ ຄວາມຍືດຫຍຸ່ນ. TLC ມີປະໂຫຍດສຳລັບການກຳນົດ, ການທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດ, ການຕິດຕາມກວດກາການສັງເຄາະ ແລະ ການວິເຄາະຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດ. ເຖິງວ່າຈະມີຂໍ້ຈຳກັດໃນການວັດແທກປະລິມານ ແລະ ຄວາມອ່ອນໄຫວ, TLC ຍັງຄົງເປັນທາງເລືອກຫຼັກສຳລັບການກວດ ແລະ ການທົດສອບປົກກະຕິ. ດ້ວຍການພັດທະນາຂອງ HPTLC, ຄວາມສາມາດຂອງ TLC ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມັນສາມາດຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການຂອງການວິເຄາະການຢາທີ່ເຂັ້ມງວດ ແລະ ໄດ້ມາດຕະຖານຫຼາຍຂຶ້ນ.
ຖ້າທ່ານຕ້ອງການ, ຂ້ອຍສາມາດເພີ່ມຕົວຢ່າງການສຶກສາກໍລະນີ (ເຊັ່ນ: ການລະບຸຢາພາຣາເຊຕາມອນ, ຄາເຟອີນ, ຫຼືສານປະກອບຕົວໝາຍໃນຂີ້ຫມິ້ນ) ພ້ອມດ້ວຍຄໍາແນະນໍາສໍາລັບໄລຍະເຄື່ອນທີ່ ແລະ ວິທີການເບິ່ງເຫັນທີ່ນິຍົມໃຊ້ໃນຫ້ອງທົດລອງ.
