Mekhoa ea Chromatography ea Lera le Lesesaane ho Pharmacy
Pendahuluan
Thin Layer Chromatography (TLC) ke mokhoa o tloaelehileng haholo oa tlhahlobo o sebelisoang indastering ea meriana. Mokhoa ona o tsebahala ka bonolo ba oona, lebelo, le theko e tlaase, hammoho le bokhoni ba oona ba ho fana ka tlhaiso-leseling ea bohlokoa mabapi le sebopeho sa sampole. Lilaboratoring tsa meriana, TLC e sebelisoa khafetsa lipatlisisong le nts'etsopele ea meriana, litekong tsa thepa e tala, le taolong ea boleng ba sehlahisoa se felileng. Le hoja lisebelisoa tsa sejoale-joale tsa tlhahlobo tse kang HPLC le LC-MS li ntse li sebelisoa haholoanyane, TLC e ntse e le ea bohlokoa ka lebaka la bonolo ba eona ba ts'ebetso le bokhoni ba eona e le mokhoa oa pele oa tlhahlobo.
Melao-motheo ea Motheo ea Chromatography ea Lera le Lesesaane
Molao-motheo oa TLC o thehiloe karohanong ea likarolo tsa motsoako ho latela liphapang tsa tsona tsa ho lumellana bakeng sa mekhahlelo e 'meli: mohato o sa sisinyeheng le mohato o tsamaeang. Mokhahlelo o sa sisinyeheng hangata ke lera le lesesaane la adsorbent joalo ka silica gel, alumina, kapa cellulose e koahetsoeng holim'a khalase, aluminium, kapa poleiti ea polasetiki. Mokhahlelo o tsamaeang, ha ho le joalo, ke motsoako oa solvent kapa solvent o tsamaeang ka mohato o sa sisinyeheng ka lebaka la ketso ea capillary.
Ha sampole e bonoa botlaaseng ba poleiti 'me poleiti e kenngoa ka har'a sejana se ntseng se hola se nang le mohato o tsamaeang, motsoako o tla tsamaea ho ea holimo. Likarolo tse qhibilihang haholoanyane mohatong o tsamaeang 'me li sebelisana hanyane le mohato o sa emeng li tla tsamaea hole, ha likarolo tse sebelisanang ka matla le mohato o sa emeng li tla bolokoa 'me li tsamaee ka potlako e fokolang. Sephetho ke karohano ka mokhoa oa matheba libakeng tse fapaneng.
Likarolo tse ka Sehloohong ho TLC
Mokhoa oa meriana, katleho ea TLC e itšetlehile haholo ka khetho le boleng ba likarolo tsa eona tse ka sehloohong:
1. Poleiti ea TLC
Hangata lipoleiti li koahetsoe ka gel ea silica ea polar (SiO₂). Gel ea silica e loketse ho arola mefuta e mengata ea metsoako ea lithethefatsi, haholo-holo e nang le li-polarities tse fapaneng. Lipoleiti tsa mohato o khutlisitsoeng morao, tse kang C18, li boetse li fumaneha bakeng sa metsoako e meng e seng ea polar kapa metsoako e itseng e thata ho e arola mohatong o tloaelehileng.
2. Mokhahlelo o tsamayang (eluent)
Eluent e ka ba solvent e le 'ngoe kapa motsoako. Khetho e itšetlehile ka litšobotsi tsa lik'hemik'hale tsa analyte, haholo-holo polarity ea eona. Metsoako e tloaelehileng e kenyelletsa chloroform–methanol, ethyl acetate–hexane, kapa toluene–acetate. Karolelano ea solvent hangata e ntlafatsoa ho fihlela likarohano tse bohale.
3. Sekepe sa nts'etsopele
Sejana se tlameha ho koaloa ka thata ho lumella kamore hore e tlale mouoane o qhibilihang. Ho tlala hona ho thusa ho hlahisa ntshetsopele e tsitsitseng le libaka tse betere.
4. Mehlala le maemo a papiso
Tlhahlobong ea meriana, lisampole hangata li bapisoa le maemo ho netefatsa boitsebahatso kapa bohloeki. Ho bona maemo le sampole poleiting e le 'ngoe ho eketsa ts'epo ea tlhaloso.
5. Ho lemoha matheba
Matheba a ka bonoa ka mahlo haeba a na le 'mala, kapa a sebelisoa khanya ea UV (254 nm kapa 366 nm). Ka tsela e 'ngoe, li-reagent tse fafatsang tse kang ninhydrin (bakeng sa li-amino acid), Dragendorff (bakeng sa li-alkaloid), anisaldehyde sulfate (bakeng sa li-metabolite tse fapaneng), kapa iodine li ka sebelisoa.
Mehato ea ho kenya tšebetsong KLT
Mokhoa oa TLC lefapheng la meriana ka kakaretso o kenyelletsa mehato e latelang ea bohlokoa:
1. Ho lokisa poleiti
Haeba o sebedisa dipoleiti tse seng di loketse ho sebediswa, mohato ona o bonolo. Leha ho le jwalo, maemong a mang, dipoleiti di ka hloka ho kenngwa tshebetsong ka ho futhumatsa (mohlala, ho 100–120°C) ho tlosa mongobo o ka amang karohano.
2. Ho bona sampole
Sampole e bonoa ho sebelisoa capillary kapa micropipette moleng oa ho qala, ka sebaka se itseng pakeng tsa matheba. Matheba a lokela ho ba manyane le a teteaneng ho thibela letheba ho ata.
3. Ntlafatso ea Chromatogram
Poleiti e beoa ka phapusing e ntseng e hola ka boemo ba solvent bo ka tlase ho mola o nang le sebaka. Solvent e lumelloa ho nyolohela boemong bo lakatsehang, ebe poleiti e tlosoa ebe ea omisoa.
4. Pono le ho tsebahatsa matheba
Kamora ho oma, matheba a bonoa ka UV kapa li-reagent tse fafatsang. Maemo a matheba a lekanngoa ho bala boleng ba Rf (Retardation factor):
\[
R_f = \frac{\text{sebaka sa maeto}}{\text{sebaka sa maeto a pele a solvent}}
\]
Boleng ba Rf bo ka sebelisoa e le paramethara ea boitsebiso, haholo-holo ha bo bapisoa le maemo 'me bo etsoa tlas'a maemo a tšoanang a tlhahlobo.
Likopo tsa TLC ho Pharmacy
TLC e na le mefuta e fapaneng ea lits'ebetso tsa bohlokoa haholo lefatšeng la meriana, ho kenyeletsoa:
1. Ho tsebahatsa thepa e tala bakeng sa meriana
TLC e atisa ho sebediswa ho netefatsa hore thepa e tala e amohetsweng e fihlela ditlhoko. Mohlala, ho hlwaya motsoako o itseng o sebetsang ho ka etswa ka ho bapisa Rf ya sampole le maemo a semmuso.
2. Teko ea bohloeki le ho lemoha litšila
Taolong ea boleng, TLC e ka bontša boteng ba litšila kapa lihlahisoa tse senyehang. Libaka tse ling tse ka nģ'ane ho sebaka sa mantlha li bontša litšila tse ka bang teng.
3. Ho beha leihlo tshebetso ya ho kopanya
Phuputsong le nts'etsopele ea lithethefatsi, TLC e sebelisoa ho lekola likarabelo tsa lik'hemik'hale: hore na li-reactants li ntse li le teng, hore na lihlahisoa lia thehoa, le hore na karabelo e fihla boemong ba eona bo botle neng.
4. Tlhahlobo ea meriana ea limela le ea litlama
TLC e sebelisoa haholo tlhahlobong ea litlama tse nkiloeng ho meriana. Li-pharmacopoei tse ling li boetse li thathamisa mekhoa ea TLC ea ho khetholla metsoako e tšoaeang lihlahisoa tsa litlama.
5. Teko e bonolo ea botsitso
Lithutong tsa pele tsa botsitso, TLC e ka thusa ho lemoha ho thehoa ha lihlahisoa tse senyehang ka lebaka la mocheso, khanya, kapa mongobo.
Melemo le Meeli ea TLC
Boemo bo phahameng
– E potlakile ebile e theko e tlase ha e bapisoa le mekhoa e rarahaneng ea lisebelisoa.
– Ho bonolo ho e etsa mme ha e hloke disebediswa tse turang.
– E tenyetseha, hobane e ka arola mefuta e mengata ea metsoako ka mefuta e fapaneng ea li-eluent le mekhahlelo e sa sisinyeheng.
– Tlhahlobo e atlehang, e loketseng mehato ea pele ea tlhahlobo kapa lipatlisiso.
Meeli
– Ka linako tse ling ho ikatisa hape hoa fokola haeba maemo a sa laoloe ka thata (ho tlala ha sejana, mongobo, boleng ba ho qhibiliha).
– Tekanyo e lekanyelitsoe, leha e ka ntlafatsoa ka densitometry (TLC Scanner).
– Hangata kutlo e tlase ho feta HPLC kapa LC-MS.
Ntlafatso ea Sejoale-joale: HPTLC
Jwalo ka ntshetsopele ya TLC, High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC) e tsebahala. HPTLC e sebedisa dipoleiti tse nang le dikarolwana tse tshesane le lera le tshwanang haholoanyane, e leng se fellang ka dikarohano tse bohale le tse utlwahalang haholoanyane tse ka sekasekwang ka bongata ho sebediswa di-scanner tsa densitometrike. Indastering ya meriana, HPTLC e fana ka tekatekano pakeng tsa bonolo ba TLC le ho nepahala ha mekgwa ya sejwalejwale ya disebediswa.
Qetello
Kromatography ea Lera le Lesesaane (TLC) e ntse e le mokhoa oa bohlokoa oa tlhahlobo indastering ea meriana ka lebaka la bonolo ba eona, lebelo le ho tenyetseha. TLC e na le thuso bakeng sa ho khetholla, ho hlahloba bohloeki, ho lekola tlhahiso, le tlhahlobo ea lihlahisoa tsa tlhaho. Ho sa tsotellehe meeli ea ho lekanya le ho utloisisa, TLC e ntse e le khetho ea mantlha bakeng sa tlhahlobo le liteko tsa kamehla. Ka nts'etsopele ea HPTLC, bokhoni ba TLC bo eketsehile, e e nolofalletsang ho fihlela litlhoko tsa tlhahlobo e thata le e tloaelehileng ea meriana.
Haeba o lakatsa, nka eketsa mehlala ea thuto ea nyeoe (mohlala, ho khetholla paracetamol, caffeine, kapa metsoako ea matšoao ka har'a turmeric) e felletseng ka likhothaletso tsa mekhahlelo ea ho tsamaea le mekhoa ea pono e sebelisoang haholo laboratoring.
