Tekinolosi o le Chromatography Layer Manifi i Fale Talavai
Pendahuluan
O le Thin Layer Chromatography (TLC) o se metotia fa'ata'ita'i masani e fa'aaogaina i le alamanuia o vaila'au. O lenei metotia ua lauiloa i lona faigofie, saoasaoa, ma le taugofie, fa'apea fo'i ma lona gafatia e tu'uina atu ai fa'amatalaga taua e uiga i le tu'ufa'atasiga o se fa'ata'ita'iga. I totonu o fale su'esu'e vaila'au, e masani ona fa'aaogaina le TLC i su'esu'ega ma le atina'eina o vaila'au, su'ega o mea mata, ma le puleaina o le lelei o oloa ua mae'a. E ui o lo'o fa'ateleina le fa'aaogaina o meafaigaluega fa'ata'ita'i fa'aonaponei e pei o le HPLC ma le LC-MS, ae o lo'o tumau pea le taua o le TLC ona o lona faigofie o le fa'aogaina ma lona gafatia e avea ma metotia muamua e su'esu'e ai.
Mataupu Faavae Autu o le Chromatography Layer Manifi
O le mataupu faavae o le TLC e faavae i luga o le vavaeeseina o vaega o se paluga e faavae i luga o lo latou eseesega i le vavalalata mo vaega e lua: o le vaega tumau ma le vaega feaveaʻi. O le vaega tumau e masani lava o se vaega manifinifi o le adsorbent e pei o le silica gel, alumina, poʻo le cellulose ua ufiufi i luga o se tioata, alumini, poʻo se ipu palasitika. Ae o le vaega feaveaʻi, o se solvent poʻo se paluga solvent e fealuaʻi i totonu o le vaega tumau ona o le gaioiga capillary.
A vaaia se faʻataʻitaʻiga i le pito i lalo o se ipu ma tuʻu le ipu i totonu o se ipu o loʻo atiaʻe o loʻo i ai se vaega feaveaʻi, o le a alu aʻe le vailaʻau faʻamamā. O vaega e sili atu ona faigofie ona faʻamamā i le vaega feaveaʻi ma e itiiti le fegalegaleai ma le vaega tumau o le a mamao atu le malaga, aʻo vaega e sili atu ona malolosi le fegalegaleai ma le vaega tumau o le a taofia ma e itiiti le vave o le malaga. O le iʻuga o se vaeluaga i foliga o ni togitogi i tulaga eseese.
Vaega Autū i le TLC
I faiga fa'afoma'i, o le manuia o le TLC e fa'alagolago tele lava i le filifilia ma le lelei o ona vaega autu:
1. Ipu TLC
E masani ona ufiufi ia ipu i le polar silica gel (SiO₂). E talafeagai le silica gel mo le vaevaeina o le tele o ituaiga o vailaʻau, aemaise lava i latou e eseese polarities. O ipu reversed-phase, e pei o le C18, e maua foʻi mo nisi vailaʻau e le polar poʻo nisi vailaʻau e faigata ona vaeluaina i le tulaga masani.
2. Vaega feaveaʻi (eluent)
E mafai ona avea le eluent ma se solvent e tasi pe o se paluga. O le filifiliga e faʻalagolago i meatotino faʻakemikolo o le analyte, aemaise lava lona polarity. O paluga masani e aofia ai le chloroform–methanol, ethyl acetate–hexane, poʻo le toluene–acetate. O le fua faatatau o le solvent e masani ona faʻaleleia atili e maua ai ni vavaeʻesega manino.
3. Va'a atina'e
E tatau ona tapuni lelei le fagu ina ia mafai ai ona fa'asusuina le potu i le ausa o le vaila'au fa'amama. O lenei fa'asusu e fesoasoani e maua ai se atina'e tutusa ma ni togitogi lelei.
4. Faʻataʻitaʻiga ma tulaga faʻatusatusaga
I le au'ili'iliga o vaila'au, e masani ona fa'atusatusa fa'ata'ita'iga i tulaga fa'atonuina e fa'amaonia ai le fa'asinomaga po'o le mama a'ia'i. O le va'aia o le tulaga fa'atonuina ma le fa'ata'ita'iga i luga o le ipu e tasi e fa'ateleina ai le fa'atuatuaina o le fa'amatalaga.
5. Iloa o vaega
E mafai ona va'aia mata o ila pe afai e lanu, pe fa'aaogaina le malamalama UV (254 nm po'o le 366 nm). O se isi auala, e mafai ona fa'aaogaina ni vaila'au fa'asusu e pei o le ninhydrin (mo amino acids), Dragendorff (mo alkaloids), anisaldehyde sulfate (mo metabolites eseese), po'o le iodine.
Laasaga o le Fa'atinoina o le KLT
O le faiga o le TLC i le fale talavai e masani ona aofia ai laasaga taua nei:
1. Sauniuniga o le ipu
Afai e fa'aaogaina ni ipu ua sauni e fa'aaoga, e faigofie lava lenei la'asaga. Peita'i, i nisi tulaga, atonu e mana'omia ona fa'agaoioia ipu e ala i le fa'avevela (e pei o le 100–120°C) e aveese ai le susu e ono a'afia ai le vavae'eseina.
2. Fa'ailoga o le va'ai
E siaki le fa'ata'ita'iga e fa'aaoga ai se capillary po'o se micropipette i le laina amata, fa'atasi ai ma se mamao fa'apitoa i le va o vaega. E tatau ona laiti ma mafiafia vaega ina ia puipuia ai le sosolo o le vaega.
3. Atina'eina o le Chromatogram
E tu'u le ipu i totonu o le potu e fa'atupuina ai le vaila'au fa'amama ma e i lalo ifo o le laina o le vaila'au fa'amama. E fa'ataga le vaila'au fa'amama e si'i i le tulaga e mana'omia, ona aveese lea o le ipu ma fa'amago.
4. Va'aiga ma le fa'ailoaina o togitogi
A uma ona mago, ona mata'ituina lea o ila i le UV po'o le spray reagents. Ona fuaina lea o tulaga o ila e fuafua ai le tau o le Rf (Retardation factor):
\[
R_f = \frac{\text{mamao o femalagaaiga i le nofoaga}}{\text{mamao o femalagaaiga i luma o le solvent}}
\]
E mafai ona faʻaaogaina le tau Rf o se faʻailoga e iloa ai, aemaise lava pe a faʻatusatusa i tulaga faʻatonuina ma faʻatinoina i lalo o tulaga faʻataʻitaʻi tutusa.
Talosaga TLC i Fale Talavai
E tele faʻaoga taua a le TLC i le lalolagi o vailaʻau, e aofia ai:
1. Fa'ailoaina o mea mata mo vaila'au
E masani ona faʻaaogaina le TLC e faʻamautinoa ai o mea mata e maua e ausia tulaga faʻatulagaina. Mo se faʻataʻitaʻiga, o le faʻailoaina o se vailaʻau malosi faʻapitoa e mafai ona faia e ala i le faʻatusatusaina o le Rf o le faʻataʻitaʻiga i se tulaga aloaia.
2. Su'ega mama ma le iloa o mea leaga
I le puleaina o le lelei, e mafai e le TLC ona faʻailoa mai ai le i ai o mea leaga poʻo oloa ua pala. O isi togitogi faaopoopo i tua atu o le togitogi autu e faʻailoa mai ai mea leaga e ono i ai.
3. Mata'ituina le faagasologa o le tuufaatasia
I suʻesuʻega ma le atinaʻeina o vailaʻau, e faʻaaogaina le TLC e mataʻituina ai tali faʻakemikolo: pe o iai pea ni vailaʻau e tali atu i ai, pe ua fausia ni oloa, ma le taimi e oʻo ai le tali atu i lona tulaga sili ona lelei.
4. Su'esu'ega o vaila'au fa'a-fualaau ma la'au 'aina
E fa'aaogaina lautele le TLC i le au'ili'iliga o mea'ai mai la'au fa'afoma'i. O nisi o vaila'au fa'afoma'i o lo'o lisiina ai fo'i metotia o le TLC mo le fa'ailoaina o vaila'au fa'ailoga i oloa fa'a-la'au.
5. Su'ega faigofie o le mautu
I suʻesuʻega muamua o le mautu, e mafai e le TLC ona fesoasoani e iloa ai le faʻavaeina o oloa faʻaleagaina ona o le vevela, malamalama, poʻo le susu.
Lelei ma Tapula'a o le TLC
Fa'asilisili
– Vave ma taugofie pe a faʻatusatusa i metotia faigata o meafaigaluega.
- E faigofie ona fai ma e le manaʻomia ni meafaigaluega taugata.
– Fetuutuunai, auā e mafai ona vavaeeseina le tele o ituaiga o mea fa'afefiloi e eseese i mea eluents ma vaega tumau.
– Su'esu'ega lelei, talafeagai mo la'asaga muamua o au'ili'iliga po'o su'esu'ega.
Tapula'a
– O nisi taimi e le lelei le toe gaosia pe afai e le o pulea lelei tulaga (fa'atumuina o le va'a, susū, lelei o le vaila'au fa'amama).
– E fa'atapula'aina le fuaina, e ui lava e mafai ona fa'aleleia atili i le densitometry (TLC Scanner).
– E masani ona maualalo le maaleale nai lo le HPLC poʻo le LC-MS.
Atina'e Fa'aonaponei: HPTLC
O se atina'eina o le TLC, ua lauiloa ai le High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC). E fa'aaoga e le HPTLC ni ipu e sili atu ona manifinifi ma se vaega e sili atu ona tutusa, ma i'u ai i ni vaeluaga e sili atu ona ma'ai ma sili atu ona maaleale e mafai ona iloiloina fa'atatau e fa'aaoga ai ni scanner densitometric. I le pisinisi vaila'au, e ofoina atu e le HPTLC se paleni i le va o le faigofie o le TLC ma le sa'o o metotia fa'aonaponei o meafaigaluega.
I'uga
O le Thin Layer Chromatography (TLC) o loʻo tumau pea o se metotia taua o suʻesuʻega i le alamanuia o vailaʻau ona o lona faigofie, saoasaoa, ma le fetuʻunaʻi. E aoga le TLC mo le faʻailoaina, suʻega mama, mataʻituina o le faʻatulagaina, ma le suʻesuʻeina o oloa faʻanatura. E ui i tapulaʻa i le fuaina ma le maaleale, o le TLC o loʻo tumau pea le filifiliga autu mo le suʻesuʻeina ma le faia o suʻega masani. Faatasi ai ma le atinaʻeina o le HPTLC, ua faʻateleina le gafatia o le TLC, ma mafai ai ona faʻafetaui manaʻoga o suʻesuʻega faʻafomaʻi sili atu ona faʻamaoni ma faʻatulagaina.
Afai e te manaʻo ai, e mafai ona ou faʻaopoopoina ni faʻataʻitaʻiga o suʻesuʻega (e pei o le faʻailoaina o le paracetamol, caffeine, poʻo ni faʻailoga i le turmeric) faʻatasi ai ma fautuaga mo vaega feaveaʻi ma metotia faʻaalia e masani ona faʻaaogaina i totonu o le fale suʻesuʻe.
