Usoro Chromatography dị gịrịgịrị na ụlọ ahịa ọgwụ
Pendahuluan
Usoro nyocha dị nro (TLC) bụ usoro a na-ejikarị eme ihe n'ụlọ ọrụ ọgwụ. A maara usoro a maka mfe ya, ọsọ ya, na ọnụ ahịa ya dị ala, yana ikike ya inye ozi dị mkpa gbasara ihe mejupụtara ihe nlele. N'ụlọ nyocha ọgwụ, a na-ejikarị TLC eme ihe na nyocha na mmepe ọgwụ, nnwale ihe eji arụ ọrụ, na njikwa mma ngwaahịa emechara. Ọ bụ ezie na a na-ejikarị ngwa nyocha ọgbara ọhụrụ dịka HPLC na LC-MS eme ihe, TLC ka dị mkpa n'ihi ịdị mfe nke ọrụ ya na ikike ya dị ka usoro nyocha mbụ.
Ụkpụrụ Ndị Dị Mkpa nke Chromatography Layer Dị Mkpirikpi
Ụkpụrụ nke TLC dabere na nkewa nke ihe mejupụtara ngwakọta dabere na ọdịiche ha na njikọ maka usoro abụọ: usoro kwụ ọtọ na usoro mkpanaka. Usoro kwụ ọtọ na-abụkarị obere oyi akwa nke adsorbent dị ka silica gel, alumina, ma ọ bụ cellulose nke a kpụchara n'elu iko, aluminom, ma ọ bụ efere plastik. Usoro mkpanaka, ka ọ dị ugbu a, bụ ngwakọta ihe mgbaze ma ọ bụ ihe mgbaze nke na-agafe usoro kwụ ọtọ n'ihi ọrụ capillary.
Mgbe a hụrụ ihe nlele n'ala efere ma tinye efere ahụ n'ime arịa na-eto eto nke nwere usoro na-agagharị agagharị, ihe mgbaze ahụ ga-aga elu. Ihe ndị na-agbaze nke ọma n'oge ngagharị ma na-anaghị akpakọrịta na usoro na-anaghị agagharị ga-aga n'ihu, ebe ihe ndị na-emekọrịta nke ọma na usoro na-anaghị agagharị ga-ejide ma na-agafe ngwa ngwa. Ihe si na ya pụta bụ nkewa n'ụdị ntụpọ n'ọnọdụ dị iche iche.
Isi ihe dị na TLC
N'ọrụ ọgwụ, ihe ịga nke ọma nke TLC dabere na nhọrọ na ịdị mma nke ihe mejupụtara ya bụ isi:
1. Efere TLC
A na-ejikarị gel silica polar (SiO₂) ekpuchi efere ndị ahụ. Gel silica dị mma maka ikewapụ ọtụtụ ụdị ọgwụ, ọkachasị ndị nwere polarities dị iche iche. E nwekwara efere ndị a gbanwere agbanwe, dị ka C18, maka ọtụtụ ihe ndị na-abụghị polar ma ọ bụ ụfọdụ ihe ndị siri ike ikewapụ n'oge nkịtị.
2. Usoro mkpanaka (eluent)
Eluent ahụ nwere ike ịbụ otu ihe mgbaze ma ọ bụ ngwakọta. Nhọrọ ya dabere na ihe kemịkalụ nke analyte, ọkachasị polarity ya. Ngwakọta ndị a na-ahụkarị gụnyere chloroform–methanol, ethyl acetate–hexane, ma ọ bụ toluene–acetate. A na-emekarị ka oke ihe mgbaze ahụ dị mma iji nweta nkewa dị nkọ.
3. Ụgbọ mmepe
A ga-emechi arịa ahụ nke ọma ka uzuoku mmiri jupụta n'ime ụlọ ahụ. Oke a na-enyere aka ịmepụta mmepe na ebe ndị ka mma.
4. Ihe atụ na ụkpụrụ ntụnyere
N'ihe gbasara nyocha ọgwụ, a na-atụnyere ihe atụ na ọkọlọtọ iji gosi na ọ bụ eziokwu ma ọ bụ na ọ dị ọcha. Ịchọpụta ọkọlọtọ na ihe atụ n'otu efere na-eme ka nkọwa ahụ dịkwuo mfe.
5. Nchọpụta ntụpọ
A pụrụ ịhụ ntụpọ ndị ahụ anya ma ọ bụrụ na ha nwere agba, ma ọ bụ site na iji ọkụ UV (254 nm ma ọ bụ 366 nm). Ma ọ bụghị ya, enwere ike iji ihe ndị na-agba mmiri dịka ninhydrin (maka amino acid), Dragendorff (maka alkaloids), anisaldehyde sulfate (maka metabolites dị iche iche), ma ọ bụ iodine.
Usoro nke Mmejuputa KLT
Usoro TLC na ụlọ ahịa ọgwụ na-agụnyekarị usoro ndị a dị mkpa:
1. Nkwadebe efere
Ọ bụrụ na ị na-eji efere ndị a kwadebere iji, usoro a dị mfe. Agbanyeghị, n'ọnọdụ ụfọdụ, ọ ga-adị mkpa ka e mee ka efere ndị ahụ rụọ ọrụ site na ikpo ọkụ (dịka ọmụmaatụ, ruo 100–120°C) iji wepụ mmiri mmiri nke nwere ike imetụta nkewa.
2. Ịchọpụta ihe nlele
A na-eji ihe mkpuchi ma ọ bụ obere pipette ahụ achọpụta ihe nlele ahụ n'ahịrị mmalite, ebe anya dị kpọmkwem n'etiti ntụpọ ndị ahụ kwesịrị ịdị obere ma dị oke arọ iji gbochie ntụpọ ahụ ịgbasa.
3. Mmepụta chromatogram
A na-etinye efere ahụ n'ime ụlọ na-etolite, ebe ọkwa ihe mgbaze dị n'okpuru akara ntụpọ ahụ. A na-ahapụ ihe mgbaze ahụ ka ọ rịgoro ruo ọkwa achọrọ, wee wepụ efere ahụ ma kpọọ nkụ.
4. Ịhụ ihe na ịchọpụta ntụpọ ndị ahụ
Mgbe ha kpọchara nkụ, a na-ahụ ntụpọ ndị ahụ site na iji UV ma ọ bụ ihe fesa fesa. A na-atụzi ọnọdụ ntụpọ ndị ahụ iji gbakọọ uru Rf (Retardation factor):
\[
R_f = \frac{\text{ebe njem dị anya}}{\text{ebe njem dị anya n'ihu}}
\]
Enwere ike iji uru Rf dị ka paramita njirimara, ọkachasị ma e jiri ya tụnyere ọkọlọtọ ma mee ya n'okpuru otu ọnọdụ nyocha ahụ.
Ngwa TLC na Ọgwụ
TLC nwere ọtụtụ ngwa dị oke mkpa n'ụwa ọgwụ, gụnyere:
1. Nchọpụta ihe eji eme ọgwụ
A na-ejikarị TLC eme ihe iji hụ na ihe ndị e ji emepụta ihe ruru nkọwapụta. Dịka ọmụmaatụ, enwere ike ịchọpụta ihe mejupụtara ihe na-arụ ọrụ kpọmkwem site na iji Rf nke ihe nlele ahụ tụnyere ọkọlọtọ gọọmentị.
2. Nnwale ịdị ọcha na nchọpụta adịghị ọcha
N'ịchịkwa mma, TLC nwere ike igosi ọnụnọ nke ihe ndị na-adịghị ọcha ma ọ bụ ngwaahịa ndị na-emebi emebi. Ebe ndị ọzọ gafere ebe mbụ na-egosi ihe ndị nwere ike ịdị ọcha.
3. Nlekota usoro mmepụta ihe
N'ime nnyocha na mmepe ọgwụ, a na-eji TLC enyocha mmeghachi omume kemịkalụ: ma ihe ndị na-emeghachi omume ka dị, ma ngwaahịa ndị e mepụtara, na mgbe mmeghachi omume ahụ ruru ebe kacha mma ya.
4. Nyocha Phytopharmaceutical na herbal
A na-ejikarị TLC eme ihe n'inyocha ihe ndị sitere n'osisi ọgwụ. Ụfọdụ ọgwụ na-edepụtakwa ụzọ TLC maka ịchọpụta ihe ndị e ji amata ihe dị na ngwaahịa ahịhịa.
5. Nnwale nkwụsi ike dị mfe
N'ọmụmụ ihe nkwụsi ike mbụ, TLC nwere ike inyere aka ịchọpụta mmepụta nke ngwaahịa mmebi n'ihi okpomọkụ, ìhè, ma ọ bụ mmiri.
Uru na Mmachi nke TLC
Nke kacha elu
– Ngwa ngwa ma dịkwa ọnụ ala ma e jiri ya tụnyere ụzọ ngwa dị mgbagwoju anya.
– Ọ dị mfe ime ma ọ chọghị akụrụngwa dị oke ọnụ.
– Na-agbanwe agbanwe, n'ihi na ọ nwere ike kewaa ọtụtụ ụdị ihe mejupụtara ya na mgbanwe dị iche iche na eluents na usoro kwụ ọtọ.
– Nnyocha dị irè, nke dabara adaba maka ọkwa mbụ nke nyocha ma ọ bụ nyocha.
Oke
– Mmepụta ihe na-adịghị mma mgbe ụfọdụ ma ọ bụrụ na ọnọdụ anaghị achịkwa nke ọma (njupụta nke arịa, iru mmiri, na àgwà ihe mgbaze).
– Ọnụọgụ dị oke, mana enwere ike imeziwanye ya site na iji densitometry (TLC Scanner).
– Mmetụta uche na-adịkarị ala karịa HPLC ma ọ bụ LC-MS.
Mmepe nke Oge A: HPTLC
Dịka mmepe nke TLC, a maara High-Performance Thin-Layer Chromatography (HPTLC). HPTLC na-eji efere nwere obere ihe na oyi akwa yiri nke ahụ, na-ebute nkewa dị nkọ, nke dị nro karị nke enwere ike inyocha ya n'ọtụtụ site na iji ihe nyocha densitometric. N'ụlọ ọrụ ọgwụ, HPTLC na-enye nguzozi n'etiti ịdị mma nke TLC na izi ezi nke ụzọ ngwa ọgbara ọhụrụ.
Mmechi
Chromatography nke dị gịrịgịrị (TLC) ka bụ ụzọ nyocha dị mkpa n'ụlọ ọrụ ọgwụ n'ihi ịdị mfe ya, ọsọ ya, na mgbanwe ya. TLC bara uru maka nchọpụta, nnwale ịdị ọcha, nlekota njikọta, na nyocha ngwaahịa eke. N'agbanyeghị oke na nhazi na mmetụta, TLC ka bụ nhọrọ mbụ maka nyocha na nnwale oge niile. Site na mmepe nke HPTLC, ikike TLC amụbaala, na-eme ka o nwee ike igbo mkpa nke nyocha ọgwụ siri ike na nke a na-ahazi.
Ọ bụrụ na ịchọrọ, enwere m ike itinye ihe atụ ọmụmụ ihe (dịka ọmụmaatụ, ịchọpụta paracetamol, caffeine, ma ọ bụ ihe ndị na-egosi ihe dị na turmeric) yana ndụmọdụ maka usoro mkpanaka na ụzọ nlele nke a na-ejikarị eme ihe n'ụlọ nyocha.
